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这样美丽的作图,你能猜想到是怎样做出来的吗?其实这是一种微生物的培养皿。有些微生物呈现不同的颜色,如金黄色葡萄球菌为粉红色或者绿色lb培养基,铜绿假单胞菌为绿色,大肠杆菌为黄色等等。通过在固体培养基上培养不同的菌落而作图。微生物培养是科研中必不可少的一部分,尤其在进行分子克隆实验中,常用的质粒转化实验便是借助感受态的大肠杆菌获得多拷贝的质粒,为下一步的研究奠定基础。

接下来的时间里,小编会为大家陆续介绍分子克隆的相关知识。

今天为大家介绍下分子克隆的必备液体-LB培养基,又可分为LB肉汤培养基以及LB固体培养基。

LB肉汤培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基lb培养基,有时又称为普通培养基。生化分子实验中一般用LB培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求。可分为液体培养基和固体培养基。

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LB培养基的配制体系

5g 酵母提取物Yeast extract

10g 胰蛋白胨Tryptone

10g 氯化钠NaCl

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其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。目前LB肉汤培养基即可以单独购买试剂,也可选择购买商品化三合一试剂进行配置。

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配制方法

首先加入单蒸水,用玻璃棒搅拌溶解,然后再定容至1000ml。配置好的LB肉汤培养基分装入锥形瓶,用封口纸封好后进行高压灭菌20min。或者直接将其分装至摇菌管中灭菌,以便下一步的摇菌实验。

注意事项:

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂,通常不被微生物分解利用。固态培养基配制时则按100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉的比例进行配置,摇匀后同样进行高压灭菌20min。

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取出平板,标好平板抗生素名称,如氨苄霉素AMP+,或者卡那霉素KANA+,一般氨苄霉素AMP+为100ug/ml LB固体培养基;卡那霉素则为50ug/ml LB固体培养基。标好平板之后,可将其至于超净台内,打开超净台紫外线,进行紫外灭菌20min.

LB固体培养基高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与室温进行降温,一般降至手可触摸时,加入氨苄抗生素,并充分摇匀。注意温度过高导致抗生素失效。

倒板时,一般15-20ml倒1个板子。抗生素平板可适当倒厚点。

倒好的平板一般置于超净台内待其自然降温,凝固。然后用封口膜封边,并倒置放于4℃保存,尽量在一个月内使用。

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